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PC12细胞是什么细胞
PC12细胞是一个常用的神经细胞株。
PC12细胞株来源于一种可移植的鼠嗜铬细胞瘤,该细胞对神经生长因子(NGF)有可逆的神经元显形反应,该细胞不合成肾上腺素。PC12细胞系是来源于成年大白鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤的细胞系,培养PC12细胞系可观察PC12细胞动力学及其演化形成神经细胞与胶质细胞的过程。
研究培养PC12细胞动力学的主要方法是盖玻片培养法。
在神经生长因子诱导的PC12细胞传代培养过程中,按一定时间间隔放置盖玻片。待PC12细胞铺满盖玻片,将其取出,经吉姆萨染色,在光学显微镜下可观察到培养PC12细胞随培养时间展开的演化过程。裸核PC12细胞是演化形成神经细胞和胶质细胞的共同的原始干细胞,其演化的最初表现为细胞质的出现,并逐渐增多,表面形成多数细小的营养性突起,而后PC12细胞系分化形成神经细胞演化系和胶质细胞演化系。狭义的PC12细胞是指分化成为神经细胞与胶质细胞之前的PC12细胞;广义的PC12细胞则包括狭义的PC12细胞及其演化所形成的所有神经细胞与胶质细胞。
PC12细胞培养冻存方法
1. PC12细胞有两种:未分化型和分化型。其中未分化型的PC12细胞贴壁能力强,传代时需要胰酶消化,形状不规则。分化型PC12细胞传代时不需要胰酶,直接可以吹下来,形状规则。这两种细胞没有很大的区别,但我在实验中发现,未分化型的PC12细胞对药物的敏感性较之分化型的要差一些。
2. 由于PC12细胞是一种肿瘤细胞,在传代次数较多后,它的形状和性状会发生改变。这些改变尤见于未分化型PC12细胞。主要是细胞形状变得更加不规则,对药物的敏感性愈加下降。因此,建议长期用PC12细胞作实验的战友最好严格控制细胞的传代次数。
3.在复苏细胞时动作一定要迅速,放入温水中1~2min后要马上加入培养液中,培养12~24小时后更换一次培养液,这样不仅可以把DMSO吸掉,而且可以将死亡的细胞也吸掉。细胞一天一看即可,经常动会有影响。注意过滤后血清的PH值,因为培养液过滤后PH值会有所改变。复苏后的换液时间取决于您复苏时是否洗涤离心细胞,去除了冻存液中的DMSO,如果没有去除DMSO,细胞培养过夜后就要彻底换液;如果复苏时洗涤离心过,可以待传代时再换液也可。(据我个人经验,还是复苏时去除DMSO,细胞的生长状态好一些)
4. 状态良好的细胞复苏后 4 h即可贴壁,开始增殖,大约2 d即可传代,接种48h应该到了对数增长期。
5. 每天观察一两次细胞我不认为会对细胞的生长造成不良影响,不过每次观察的时间不易过长。
6. 传代时我认为最好不要用胰蛋白酶,因为胰蛋白酶对细胞有破坏作用。我以前用胰蛋白酶消化传代过PC12, 结果传代后的细胞虽然贴壁,形态也好,但就是增殖缓慢,所以我现在都是用枪吸取培养液直接吹打,传代后细胞增殖迅速,2 d就长满了(因为长的太快,我只好降低血清浓度,用5%FBS)
7. 传代的时机最好选在细胞生长旺盛,占瓶底70%-80%时最好,如果细胞长的太满,细胞的状态会越来越差,最后大片死亡;这种细胞传代后生长也不好;而且长的太满后,细胞贴壁牢,难于吹起来,相反,70%-80%时细胞很容易吹起来。
8. 如果细胞贴壁太紧,不得不用胰蛋白酶消化,注意低浓度,段时间,多洗涤。我一般用0.025%的胰蛋白酶,在镜下观察细胞突起收缩,有零星的细胞漂起就中止,或用肉眼观察,瓶底呈现薄雾状的模糊感时就中止,中止一定要彻底,要用含血清的培养液多洗涤离心几次,确保去除剩余的胰蛋白酶,否则传代后的细胞难以生长。
9. 就培养器皿的选用,我推荐在60mm的培养皿中培养传代,
第一,在皿里细胞生长的更快,我想可能是皿比瓶的气体交换更好吧;
第二,传代时吹打更方便,不易污染。
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